（武漢）為了研究錘頭狀核酶通過調(diào)控CD95的表達，對小鼠胰島細胞凋亡的影響,探索提高胰島移植物存活率的新途徑，研究者體外構(gòu)建針對CD95 mRNA 93位點的錘頭狀核酶(pU6-Rz93)和突變型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型膠原酶消化法分離小鼠胰島細胞，通過干擾素-γ(IFN-γ)和白細胞介素1α(IL-1α)誘導(dǎo)其高表達CD95后，經(jīng)鈉米載體-Effectene將核酶轉(zhuǎn)染至該細胞。通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫印跡檢測(Western blot)法檢測胰島細胞CD95的表達。胰島細胞經(jīng)抗CD95的抗體(JO2)作用后，以Caspase-3活性檢測試劑盒檢測轉(zhuǎn)染前后細胞Caspase-3活性的變化；MTT法測細胞的增殖；Annexin-Ⅴ凋亡檢測試劑盒檢測細胞凋亡，并觀察了各組細胞對細胞毒T淋巴細胞(CTL)殺傷的反應(yīng)能力。結(jié)果細胞因子可誘導(dǎo)小鼠胰島細胞高表達CD95分子。轉(zhuǎn)染pU6-Rz93組的胰島細胞CD95的表達與轉(zhuǎn)染空載體組和轉(zhuǎn)染pU6-dRz93組相比，明顯下降。經(jīng)JO2處理后，轉(zhuǎn)染pU6-Rz93組胰島細胞的Caspase-3活性和凋亡率明顯降低，細胞增殖活性和抵抗CTL殺傷的能力顯著增強。可見針對Fas mRNA 93位點的錘頭狀核酶能顯著抑制小鼠胰島細胞CD95的表達，使其免于CD95途徑的凋亡,為提高胰島移植物的存活率提供了實驗基礎(chǔ)。 /**/