（武漢）為了構(gòu)建淋病奈瑟菌膜蛋白mtrC表達(dá)質(zhì)粒，探討淋病奈瑟菌耐藥的檢測和耐藥機(jī)制。研究者從淋病奈瑟菌標(biāo)準(zhǔn)株中擴(kuò)增淋病奈瑟菌膜蛋白mtrC基因片段.酶切后插入pET-28a(+)，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-mtrC。通過質(zhì)粒雙酶切和DNA測序證實該重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化人大腸桿菌DE3中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)蛋白。結(jié)果經(jīng)酶切鑒定和測序分析，質(zhì)粒構(gòu)建正確，核苷酸序列與GeneBank(U14993)公布的序列相比較，同源性達(dá)到99.5%。通過IPFG誘導(dǎo)，SDS-PAGE可檢測到約48 500大小的融合蛋白,與預(yù)測分子量相同。可見淋病奈瑟菌膜蛋白mtrC原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建和表達(dá)成功，為研究其mtr外排系統(tǒng)的耐藥機(jī)制打下基礎(chǔ)。/**/