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結腸直腸惡性轉化中p16和Ras相關結構域家族蛋白1a的甲基

【?2006-06-20 發布?】 臨床報道  

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    使用顯微解剖法對甲醛固定石蠟包埋樣品(FF-PEAT)的甲基化進行精確鑒定目前還存在著一些問題,因為樣品體積過小而且DNA都已經遭到了破壞。其他的檢測甲基化的方法,例如甲基特異性PCR(MSP),要求對純化的DNA進行亞硫酸氫鈉修飾(SBM),這會導致大量的DNA損失。在載玻片上進行SBM可以使DNA在從腫瘤組織中分離出來前就已經進行了原位修飾,這可以省去DNA純化步驟并可以進行組織定位的基因甲基化分析??茖W家們對20份結腸直腸癌FF-PEAT樣品都用上述方法進行了測試,并用瘤內腺瘤組分來檢測結腸直腸惡性轉化過程中基因甲基化情況。去石蠟化組織切片在亞硫酸氫鈉溶液中60浸泡8小時后使用蘇木精染色,然后進行顯微解剖法進行分析。蛋白酶K裂解產物直接用作接下來的PCR的模板。使用載玻片SBM可以直接對282bp長的序列進行測序。用這種方法對DNA進行修飾,DNA的得率比常規方法高出2.6倍,平均轉換率為97%,也未發現有假陽性或者假陰性。MSP揭示了結腸直腸癌惡性轉化過程中由p16和Ras相關結構域家族蛋白1a甲基化引起的瘤內的不均一性。這種載玻片SBM可以應用于多種FF-PEAT的甲基化研究中。它可以對實體瘤進行詳細的瘤內分析。這種方法可以大大的改進人們研究致癌作用過程的效果。 /**/
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