湖北華中科技大學同濟醫(yī)學院高峰博士等在近日完成的一項國家自然科學基金課題中發(fā)現(xiàn)，增強型綠色熒光蛋白（eGFP）基因可高效轉(zhuǎn)染入永生化大鼠神經(jīng)前體細胞，并可在細胞中長期穩(wěn)定的表達和移植。這一研究結(jié)果，為eGFP作為良好的示蹤標記用于體內(nèi)移植的研究奠定了堅實基礎。

    近年來研究表明，將體外培養(yǎng)的神經(jīng)前體細胞（NPC）進行體內(nèi)移植，有望成為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療手段。然而，NPC作為細胞載體攜帶目的基因移植入人體后，如何在特定的微環(huán)境誘導下存活、分裂以至形態(tài)分化為與周圍宿主細胞相似的細胞等，已成為目前NPC移植研究領(lǐng)域的熱點。

    為探討NPC移植的新思路，高峰博士等研究人員采用體外培養(yǎng)基因轉(zhuǎn)染方法，將重組腺相關(guān)病毒（rAAV）載體介導的eGFP基因，轉(zhuǎn)染入大鼠永生化神經(jīng)前體細胞（INPC）內(nèi)，通過傳代培養(yǎng)、基因轉(zhuǎn)染、抗體鑒定等系列技術(shù)處理后，在熒光顯微鏡下觀察檢測eGFP在INPC中的表達情況。

    結(jié)果發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染24小時，神經(jīng)前體細胞出現(xiàn)綠色熒光蛋白表達，72小時轉(zhuǎn)染率達90%，傳代培養(yǎng)8周后，表達綠色熒光蛋白的陽性細胞仍高達70%~75%，細胞生長特性無明顯改變。免疫細胞化學檢測結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白神經(jīng)前體細胞抗體抗原染色均為陽性，其在培養(yǎng)基胎牛血清誘導下，可分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞。提示攜帶eGFP基因可在NPC中長期持續(xù)穩(wěn)定表達，并可作為細胞示蹤標記，以觀察細胞的增殖、分化等特性。

    據(jù)指導該研究的田玉科教授介紹，NPC是一類可分裂增殖、自我更新并具有多分化潛能的細胞，可作為神經(jīng)細胞的種子細胞，在細胞移植治療和細胞介導的基因治療中，具有潛在的臨床應用價值。而eGFP是一種優(yōu)化的突變型綠色熒光蛋白，其熒光比野生型強35倍，具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、高效表達、無種系依賴性等特點，更適用于細胞基因表達和蛋白定位檢測及細胞示蹤標記。本研究表明，eGFP的重組腺相關(guān)病毒載體，可高效轉(zhuǎn)染入NPC，并保持了NPC的基本特性。因此，可將eGFP作為一種良好的細胞示蹤劑，進行NPC在體內(nèi)移植的研究。