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弓形蟲GRA6可溶性蛋白在大腸埃希菌中的表達及純化

【?2006-09-15 發布?】 臨床報道  

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   (蘇州)為了在大腸埃希菌中高效表達及純化弓形蟲GRA6抗原,為制作弓形蟲感染基因工程診斷試劑盒奠定基礎。研究者將重組pGEX-GRA6表達載體轉化大腸埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株,在異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導下表達。超聲破壁后,通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表達產物的表達形式,并對表達產物以硫酸銨沉淀、Sephedax G50脫鹽和GST親和層析柱進行目的蛋白的純化。通過Western blotting檢測其純化的重組抗原的免疫反應性。結果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大腸埃希菌中得到了高效表達。對表達產物可溶性分析表明,表達蛋白在上清液中和包涵體中均有表達。在上清液中表達的可溶性蛋白經純化后蛋白純度可達90%以上.Western blotting分析表明純化蛋白能被弓形蟲感染的人血清所識別。可見GRA6在大腸埃希菌中得到了高效表達,重組抗原經純化后能特異性地被弓形蟲感染者血清所識別。
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