(武漢)為了探討重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子反義核苷酸(rAAV-aVEGF165)抑制大鼠角膜新生血管(CNV)發(fā)生與發(fā)展的作用。研究者三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染法構(gòu)建rAAV-aVEGF165和重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的β-半乳糖苷酶的結(jié)構(gòu)基因(rAAV-Lacz)。48只SD大鼠用抽簽法隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組24只,堿燒傷方法誘導(dǎo)CNV生成。實(shí)驗(yàn)組結(jié)膜囊注射rAAV-aVEGF165(1010pfu/ml),對(duì)照組結(jié)膜囊注射rAAV-Lacz(1010pfu/ml);5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)組織化學(xué)染色,檢測(cè)Lacz基因在結(jié)膜囊中的表達(dá)情況;堿燒傷后1、2、4、7、14及30 d,形態(tài)學(xué)分析評(píng)價(jià)角膜新生血管的生長(zhǎng)情況,免疫組織化學(xué)檢測(cè)角膜組織中VEGF的表達(dá)。結(jié)果對(duì)照組rAAV-Lacz結(jié)膜囊注射2 d后,檢測(cè)Lacz基因在結(jié)膜組織中的表達(dá)效率為21.36%±1.07%;30 d后Lacz基因在結(jié)膜下組織中的表達(dá)效率為28.02%±1.16%。堿燒傷后結(jié)膜囊注射rAAV-aVEGF165,實(shí)驗(yàn)組CNV面積明顯減少,新生血管密度降低,VEGF在角膜組織中的表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1639.22,F(xiàn)=2187.16,F(xiàn)=719.17,P<0.01)。可見rAAV-aVEGF165能顯著抑制堿燒傷后CNV的形成,其機(jī)制與降低角膜組織中VEGF的表達(dá)有關(guān),重組腺相關(guān)病毒是眼反義基因治療的有效載體。
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