（烏魯木齊）為了構(gòu)建人類8型皰疹病毒(HHV-8)基因開(kāi)放讀碼框(ORF)73C重組原核表達(dá)質(zhì)粒并誘導(dǎo)表達(dá)，獲得HHV-8潛伏態(tài)相關(guān)核抗原重組蛋白，并對(duì)其免疫活性進(jìn)行初步鑒定。研究者 軟件設(shè)計(jì)引物，分別在引物兩端添加特異的酶切位點(diǎn)，以pGEM-Teasy/ORF73質(zhì)粒為模板，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增ORF73C基因序列，克隆入原核表達(dá)載體pET-28a(+)，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-ORF73C；轉(zhuǎn)化E.coli DH5α，經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定其插入序列的正確性，轉(zhuǎn)入E.coli BL21(DE3)，并誘導(dǎo)表達(dá)，以多聚組氨酸親合層析柱純化，凝膠蛋白電泳、Western印跡方法行表達(dá)蛋白的分析和抗原特異性免疫鑒定。結(jié)果 測(cè)序結(jié)果表明構(gòu)建的pET28a-ORF73C原核表達(dá)質(zhì)粒連接正確，插入的ORF73C基因片段為453 bp。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)表明ORF73C基因成功表達(dá)，在相對(duì)分子質(zhì)量20 000處有表達(dá)條帶Western印跡分析顯示重組蛋白能被卡波濟(jì)肉瘤患者陽(yáng)性血清識(shí)別，具有良好的抗原性。可見(jiàn) 成功構(gòu)建了pET28a-ORF73C原核表達(dá)質(zhì)粒，獲得的純化HHV-8潛伏態(tài)相關(guān)核抗原蛋白與卡波濟(jì)肉瘤患者血清具有特異性識(shí)別，顯示其作為檢測(cè)抗原的可能，但其敏感性和特異性則有待進(jìn)一步的驗(yàn)證。/**/