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敲低CD2AP基因表達(dá)對(duì)足細(xì)胞增殖和分裂的影響

【?2008-08-08 發(fā)布?】 臨床報(bào)道  

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    該項(xiàng)研究目的是觀察敲低CD2相關(guān)蛋白(CD2AP)基因表達(dá)對(duì)足細(xì)胞增殖和分裂的影響。方法采用RPMI 1640培養(yǎng)基,在33℃培養(yǎng)永生化小鼠足細(xì)胞系。以PKH-26紅色熒光染料標(biāo)記足細(xì)胞后,用Metafectene轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染針對(duì)CD2AP的小分子干擾RNA(siRNA)。轉(zhuǎn)染24 h后以流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;48 h后用RT-PCR和Western印跡檢測(cè)轉(zhuǎn)染后CD2AP mRNA和蛋白表達(dá)情況;72 h后以流式細(xì)胞儀檢測(cè)足細(xì)胞增殖指數(shù)及細(xì)胞周期;用Oregon Green 488標(biāo)記的Paclitaxel直接標(biāo)記足細(xì)胞內(nèi)的微管蛋白;用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)雙核及多核足細(xì)胞的比例。結(jié)果流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,CD2AP特異性siRNA轉(zhuǎn)染效率為66.27%。轉(zhuǎn)染siRNA 48 h后,CD2AP mRNA和蛋白表達(dá)分別下降57%和39%。轉(zhuǎn)染72 h后,足細(xì)胞增殖指數(shù)顯著下降(P〈0.05),G2/M期的細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P〈0.05)。共聚焦顯微鏡下可見轉(zhuǎn)染CD2AP siRNA后,部分細(xì)胞有絲分裂后不能分離,雙核及多核足細(xì)胞的比例顯著增加(P〈0.05)。由此得出結(jié)論敲低CD2AP基因的表達(dá)能阻礙細(xì)胞有絲分裂后期的細(xì)胞分離,抑制足細(xì)胞的增殖能力。/**/
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