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Skp2靶向RNA干擾質粒的構建及其對人舌鱗癌Tca8113細胞有影響 【?2009-05-07 發布?】 臨床報道
5月7日消息,中國研究者運用了RNA干擾技術阻斷人舌鱗狀細胞癌Tea8113細胞中Skp2基因的表達,觀察Skp2基因沉默后對Tea8113細胞的影響。 研究者采用真核轉錄質粒pRNAT-U6.1/Neo構建針對Skp2基因的重組轉染質粒。經聚乙烯亞胺法將其轉染Tea8113細胞,通過反轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcrip-tase polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western blot檢測Skp2、p27表達的變化;流式細胞儀、甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl terrazolium,MTT)法檢測轉染后Tea8113細胞的細胞周期、生長速度的變化。 結果發現轉染重組質粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3后,Tea8113細胞內Skp2基因在mRNA和蛋白水平上均下調表達(P〈0.01),p27基因蛋白水平上調表達(P〈0.01);而各重組質粒轉染后p27基因的mRNA水平無明顯變化。重組質粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3轉染Tea8113細胞后,與對照組相比,G1~G0期細胞增加了約22%(P〈0.01),G2~M期和S期細胞減少了約10%和12%(P〈0.01),細胞的生長速度明顯變慢(P〈0.01)。 由此,研究者得出結論,初步證明了Skp2、p27基因在口腔鱗狀細胞癌細胞分化增殖中所扮演的重要角色;篩選出了高效RNA干擾重組質粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3,為進一步研究以Skp2基因為靶點的人舌鱗狀細胞癌基因治療奠定了基礎。
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