6月25日消息，中國研究者研制了羥基磷灰石（hydroxyapatite，HAT）納米粒，評價其作為新的內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染載體的可能性。

研究者用化學共沉淀-水熱合成法制備HAT載體。經(jīng)DNA電泳做不同pH值和HAT含量的DNA結合實驗，了解HAT納米粒對DNA的結合和保護作用；用四甲基偶氮唑鹽法觀察HAT納米粒對宮頸癌上皮Hela細胞的毒性；用Hela細胞和小鼠耳蝸原代螺旋神經(jīng)節(jié)細胞做神經(jīng)營養(yǎng)素3（neurotrophin 3，NB）體外轉(zhuǎn)染實驗（綠色熒光蛋白基因熒光顯微鏡法）及NB的蛋白印跡分析，觀察HAT介導的NB基因?qū)罴毎捏w外轉(zhuǎn)染能力和基因表達情況；經(jīng)實驗性興奮性耳毒性損傷豚鼠的耳蝸外淋巴腔灌注HAT納米載體-含增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）質(zhì)粒載體-NT3基因復合物（HAT—pEGFPC2-NT3），用免疫組化（二氨基聯(lián)苯胺法）觀察NT3在耳蝸的表達，以了解HAT納米載體在活體動物耳蝸介導基因轉(zhuǎn)染的能力。

結果發(fā)現(xiàn)含量250．0μg／ml，pH值3～7是這種長約40～50nm的短棒狀HAT納米粒能完全結合重組質(zhì)粒pEGFPC2-NT3的最低含量混懸液和最佳pH環(huán)境，并可有效保護基因不被核酸酶（DNase Ⅰ）破壞。四甲基偶氮唑鹽法觀察HAT納米粒從62．5μg／ml至500．0μg／ml4種混懸液對Hela細胞存活率無明顯影響，細胞形態(tài)無變化。EGFP熒光顯微鏡觀察顯示，HAT納米載體對Hela細胞的基因轉(zhuǎn)染率為15．7％±2．6％（-↑x±s）；將HAT—pEGFPC2-NT3轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的小鼠耳蝸神經(jīng)元，也可見明顯的EGFP表達。NT3免疫組化顯示，向?qū)嶒炐耘d奮性耳蝸損害豚鼠的耳蝸外淋巴腔灌注HAT—pEGFPC2-NT3，可見活體耳蝸神經(jīng)元內(nèi)有明顯的NT3蛋白表達。

由此，研究者得出結論，HAT納米粒不僅可介導NT3基因的體外轉(zhuǎn)染，而且可介導其耳蝸活體轉(zhuǎn)染；盡管轉(zhuǎn)染率有待提高，但由于沒有病毒載體轉(zhuǎn)染造成的生物威脅，仍不失為一種很有研究價值的非病毒型內(nèi)耳基因治療載體。