(蘇州)為了檢測(cè)凝血酶受體活化過(guò)程中血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰ bα的動(dòng)態(tài)分布及其細(xì)胞骨架蛋白的改變,揭示GP Ⅰ bα的異位分布機(jī)制與凝血酶受體在血小板信號(hào)傳遞中的作用,研究者以凝血酶受體活化肽(TRAP)誘導(dǎo)血小板活化,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)比較刺激前后血小板膜表面GPⅠ bα及P-選擇素的表達(dá),并通過(guò)轉(zhuǎn)移電泳及免疫沉淀技術(shù),分析細(xì)胞骨架中GP Ⅰ bα、肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白的變化。觀測(cè)細(xì)胞松弛素(Cytochalasin)D與腺苷三磷酸雙磷酸酶(Apyrase)Ⅶ對(duì)血小板活化過(guò)程的影響。結(jié)果TRAP作用后促使血小板活化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示其P-選擇素水平顯著升高,而GP Ⅰ bα先呈現(xiàn)進(jìn)行性減少,而后逐漸回升的可逆性變化。抑制劑作用后這一過(guò)程受到不同程度影響,其中細(xì)胞松弛素D能阻滯GPⅠ bα的內(nèi)移,ApyraseⅦ對(duì)活化過(guò)程中GPⅠ bα的逆轉(zhuǎn)沒(méi)有影響,只對(duì)它的恢復(fù)起作用,促使GPⅠ bα迅速返回細(xì)胞表面。細(xì)胞骨架蛋白分析結(jié)果也表明肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白與GPⅠ bα受刺激后呈先增加后減少的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)。細(xì)胞松弛素D能阻滯GPⅠ bα、肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白向骨架中心的轉(zhuǎn)位,ApyraseⅦ則能加快骨架蛋白在骨架中心的消散。免疫印跡證實(shí)GPⅠ bα的這種可逆性變化與血小板膜骨架緊密相關(guān)??梢娔甘荏w活化在血小板信號(hào)傳遞過(guò)程中發(fā)揮了重要作用,導(dǎo)致GP Ⅰ bα由血小板膜表面向內(nèi)轉(zhuǎn)移而后又逐漸返回至胞膜外,這種動(dòng)態(tài)變化與細(xì)胞骨架重組及二磷酸腺苷(ADP)有關(guān)。/**/