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重組人肝再生增強因子的克隆、表達及純化 【?2005-11-24 發布?】 臨床報道
為了通過構建原核表達系統,在大腸埃希菌中表達重組人肝再生增強因子(hALR)蛋白,為各種急慢性肝損傷及肝衰竭的治療提供新的治療方法奠定基礎,研究者利用正常人肝組織提取總RNA,經一步法逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)獲取hALR cDNA全序列,構建原核表達載體hALR-pET28a(+)轉化大腸埃希菌(BL21),誘導表達重組hALR蛋白,以組氨酸為標簽進行蛋白純化。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western Blot鑒定重組蛋白。結果經雙酶切和DNA測序證實hALR cDNA正確插入表達載體pET28a(+),成功表達并純化得相對分子質量為23 000的重組蛋白,低溫誘導表達使可溶蛋白明顯增加,與預期結果相符。可見成功表達和純化獲重組hALR蛋白。
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