李傳杰  梁金 （廣西醫(yī)科大學(xué)第七附屬醫(yī)院  廣西 梧州  543001）

【摘要】 目的  了解不孕不育患者解脲支原體(UU)和沙眼衣原體(CT)感染情況，探討熒光定量PCR(FQ—PCR)應(yīng)用于診治不孕不育的意義。方法  采用FQ—PCR方法檢測不孕不育患者宮頸分泌物、精液或前列腺液標本中的UU-DNA和CT-DNA含量。結(jié)果  116例不孕不育患者中有62例感染UU或CT（感染率53.4%），UU和CT的感染率分別為42.2%和17.2%，混合感染率6.0%；男性UU和CT感染率分別為35.9%和21.9%，女性UU和CT感染率分別為50.0%和11.5%；女性患者UU和CT的基因拷貝數(shù)均高于男性。結(jié)論  UU和CT是引起男女不孕不育的重要原因，UU感染率明顯高于CT；FQ—PCR技術(shù)應(yīng)用于診治UU或CT泌尿生殖道感染引起的不孕不育簡便、快捷、安全、可靠。
【關(guān)鍵詞】 不孕不育  熒光定量PCR  解脲支原體  沙眼衣原體
To testing Ureaplasma Urealyticum and Chlamydi Trachonmatis of the infecund and the can not bear patients using FQ-PCR.LI Chuan-jie,LIANG JinThe 7th affiliate hospital of Medicine University of Guang Xi, Wuzhou，Guang Xi，543001  China
【Abstract】  Objective  To find out the station of the infecund and the can not bear patients were infected by UU and CT and discuss the meaning of diagnose infecund and can not bear using FQ-PCR. Methods  Measure content of UU-DNA and CT-DNA in the secretion of uterine’s cervix，the exudates of ejaculate，prostate of the infecund and the can not bear patients using FQ-PCR. Results  There are 62 patients infected by UU or CT in all of 116 infecund and the can not bear patients(the infections rate is 53.4%). The rate of infected by UU is 42.25. the rate of infected by CT is 17.2%. The rate of infected by both UU,CT is 6.0%. Man’s rate of infected by UU ,CT is 35.9%,21.9%. Woman’s rate of infected by UU ,CT is 50.0%,11.5%. For UU’ s and CT’ s gene copy femate more than mate.  Conclusion  Infected by UU and CT is the reason causing infecund and the can not bear. UU’s infections rate is more than CT’s. FQ-PCR is a mean use to diagnose infecund and the can not bear for Genital infection by UU or CT.
【Key words】  The infecund and the can not bear patients; FQ-PCR; Ureaplasma Urealyticum; Chlamydi Trachonmatis
 
　　隨著社會的發(fā)展，不孕不育癥患者不斷增多，使之不僅是一個醫(yī)學(xué)問題，同時也成為一個社會問題。研究表明，衣原體、支原體的泌尿生殖系感染是造成男女不孕不育的因素之一。為了解我國不孕不育患者泌尿生殖道解脲支原體（UU）和沙眼衣原體（CT）的感染情況，我們采用熒光定量PCR(FQ—PCR)方法對116例不孕不育患者宮頸分泌物、精液或前列腺液標本的CT-DNA和UU-DNA含量進行了檢測，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法
　　1.1 病例選擇  選擇116例2003年5月至2005年5月就診于我院泌尿外科和婦產(chǎn)科、結(jié)婚2年以上、夫婦性生活正常、未避孕而無子女的患者，其中男性64例，女性52例，年齡20～45歲，平均29.6歲。女性患者婦檢輸卵管通暢，月經(jīng)周期基本正常。另選同期門診有正常生育能力的對照組60例，其中男性28例，女性32例，年齡23～37歲，平均28.7歲。
　　1.2 標本采集  女性患者采取截石位用窺陰器充分暴露子宮頸，以棉拭子拭去子宮頸口的分泌物后，將無菌棉拭子插入宮頸口1~2 cm處，旋轉(zhuǎn)1周，停留10~20 s，取出置含1 ml生理鹽水的無菌試管內(nèi)震蕩洗滌。男性患者則用以無菌棉拭子從精液或前列腺液中略捻少許置含1 ml生理鹽水的無菌試管內(nèi)震蕩洗滌。
　　1.3 儀器和試劑  采用美國ABI公司的Gene Amp 5700自動熒光定量PCR儀；UU和CT的FQ—PCR試劑均為廣州中山大學(xué)達安基因診斷中心產(chǎn)品。
　　1.4 實驗方法  標本洗滌液12 000 rpm離心5 min，去上清液，用堿裂解法提取UU和CT的DNA置ABI—Gene Amp 5700擴增。即：首先93℃ 2 min預(yù)變性；其次按93℃ 45 s，55℃ 60s做10個循環(huán)；然后按93℃ 30 s，55℃ 45 s做30個循環(huán)；最后由儀器自動分析計算出定量結(jié)果，Ct值＜30，則實驗結(jié)果為陽性。
　　1.5 統(tǒng)計方法  不孕不育患者UU和CT感染率與正常對照組的資料對比采用X2檢驗，女性和男性UU或CT感染者基因拷貝數(shù)的差異采用樣本均數(shù)的t檢驗。

2 結(jié)果
　　116例不孕不育患者中有62例的受檢標本檢測出 UU或CT，檢出率（53.4%）與正常對照組（11.6%）差異顯著（P＜0.01），其中：UU—DNA陽性49例，CT—DNA陽性20例，UU和CT混合感染（UU+CT陽性）7例；男性UU和CT感染率分別為35.9%和21.9%，女性UU和CT感染率分別為50.0%和11.5%；女性患者感染UU和CT的基因拷貝數(shù)均明顯高于男性（P＜0.05，P＜0.05），見表1。

 
3 討論  
　　3.1 不孕不育與泌尿生殖系UU和CT感染的關(guān)系  泌尿生殖系統(tǒng)感染UU和D-K型CT后引起局部炎癥反應(yīng)及一系列病理改變導(dǎo)致尿道炎、附睪炎、前列腺炎、陰道炎、子宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、盆腔炎等泌尿生殖系疾病[1,2]。男性泌尿生殖系感染UU后UU吸附在精子表面影響精子的正常功能使精子運動能力降低、數(shù)目減少和畸型精子增多，以及前列腺或附睪等器官感染CT后精漿的生理功能受到影響均可引發(fā)男子不孕不育；UU或CT感染引起的輸卵管粘細胞炎性病變可使輸卵管粘連、管腔變窄、阻塞導(dǎo)致卵子或受精卵通道障礙，子宮內(nèi)膜炎則干擾受精卵著床、植入及早期胚胎發(fā)育；賀惠瓊等認為UU引起女性不育的主要原因是子宮內(nèi)膜的慢性炎癥，感染誘發(fā)的變態(tài)反應(yīng)和自身免疫等亦是可能因素[3]。近年的文獻報道不孕不育患者泌尿生殖系統(tǒng)的UU和CT感染率分別達到35.5%~48.5%和22.0%~46.5% [2-4]。本組資料116例不孕不育患者中UU—DNA陽性率42.2%，CT—DNA陽性率17.2%，UU或CT的總檢出率達53.4%，而正常對照組則分別為8.3%、5.0%和11.6%，說明泌尿生殖系統(tǒng)UU和CT感染仍是不孕不育的重要原因，感染性不孕癥患者中UU的感染率明顯高于CT；UU—DNA陽性率與文獻報道基本一致，CT—DNA陽性率偏低，UU、CT混合感染（6.0%）則明顯低于祝文峰等報道的18.3%[2-4]，這可能與本地區(qū)前些年的診斷水平、診療習(xí)慣引起的病原體耐性變遷、或生活習(xí)俗等因素有關(guān)。
　　3.2 FQ—PCR定量檢測應(yīng)用于不孕不育患者的臨床意義  本文采用的FQ—PCR利用PCR結(jié)合熒光探針的體外DNA擴增技術(shù)直接發(fā)揮DNA探針雜交作用，高度敏感的熒光信號使定量檢測范圍達0-1011個基因拷貝數(shù)/ml，完全密封式操作極大地降低了PCR產(chǎn)物污染造成的假陽性，檢測過程省去擴增產(chǎn)物的后處理和儀器對PCR擴增產(chǎn)物的自動分析 [5]既節(jié)省時間又減少了傳統(tǒng)PCR目測結(jié)果的主觀誤差。 本組研究資料顯示患者宮頸分泌物、精液或前列腺液標本中的UU-DNA和CT-DNA定量的精度和范圍分別到達1.7×103～3.1×108/ml和1.8×103～6.7×107/ml，說明FQ—PCR定量結(jié)果能夠客觀、適時地反映患者的病情，這無論是對于典型的UU和CT感染，還是病程隱匿、臨床表現(xiàn)輕微或無癥狀的感染，均在疾病的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、療效觀察和判斷預(yù)后等方面有重要意義。
　　3.3 女性患者UU和CT感染率明顯高于男性的原因分析  研究資料中不孕不育患者女性感染UU和CT的基因拷貝數(shù)均明顯高于男性則可能與感染灶病理性質(zhì)和標本采樣方法等因素有關(guān)。即：女性宮頸分泌物標本因炎癥病灶組織受累細胞較多、宮頸分泌物標本采集處（2~4 cm）以易受病原體侵襲而且易于刮落的柱狀上皮細胞為主，所以標本中病原體含量相對較多；男性標本的采集大多為精液或前列腺液排經(jīng)病灶部位時“沖刷”帶出病原體或受累細胞，其病原體含量則相對較少，故臨床上行泌尿生殖系UU和CT的FQ—PCR檢測時應(yīng)高度重視標本的采集環(huán)節(jié)，綜合分析檢測結(jié)果的臨床意義。

參考文獻
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