徐灼均 （ 江門(mén)市新會(huì)區(qū)CDC  廣東  江門(mén)529100）

【摘要】 目的 評(píng)定菌落總數(shù)的不確定度。方法 采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢測(cè)結(jié)果的不確定度。結(jié)果  采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢測(cè)結(jié)果的不確定度適合于任何一次檢測(cè)。結(jié)論  用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度較方便，并且適合于每一個(gè)樣本的檢驗(yàn)結(jié)果，隨著檢驗(yàn)結(jié)果的不斷增加，可隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新其不確定度的取值范圍。
【關(guān)健詞】 微生物 不確定度
 
　　在ISO/IEC17025《校準(zhǔn)和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》中明確指出實(shí)驗(yàn)室出具的檢測(cè)報(bào)告應(yīng)包含有關(guān)評(píng)定校準(zhǔn)或測(cè)試結(jié)果的不確定度說(shuō)明，故對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行不確定度的評(píng)定成為檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的重要內(nèi)容。本文試對(duì)微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果作不確定度評(píng)定。

1 檢驗(yàn)方法
　　依據(jù)GB/T4789.2-2003食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分以無(wú)菌操作取檢樣25 g（ml）剪碎放于含有225 ml滅菌生理鹽水中，經(jīng)振搖或研磨做成1︰10的均勻稀釋樣液。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì)，選擇2～3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度作2個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入培養(yǎng)基約15  ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h±2 h。計(jì)數(shù)后以同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)報(bào)告。

2 數(shù)學(xué)模型
　　設(shè)菌落總數(shù)為A，檢測(cè)結(jié)果為X，則A=X cfu/g（ml）

3 計(jì)算不確定度[1]
　　3.1 在微生物檢驗(yàn)中，樣品中細(xì)菌分布的均勻性和重復(fù)測(cè)量帶來(lái)的不確定度是影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的主要原因，而B(niǎo)類(lèi)不確定度分量對(duì)合成不確定度影響較少。按GB/T4789.2-2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》中方法，同一樣品每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平衡樣，因此可以采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢測(cè)結(jié)果的不確定度 見(jiàn)表1。

　　　　

　　3.2 從檢驗(yàn)結(jié)果可知，如直接用貝塞爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，由于數(shù)據(jù)的散發(fā)性較大，計(jì)算出的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差很大，當(dāng)樣本均值較小時(shí)其不確定度則會(huì)過(guò)大，此時(shí)可以對(duì)上述數(shù)據(jù)取對(duì)數(shù)后，計(jì)算出樣本檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)數(shù)值的均值和殘差，將中間計(jì)算結(jié)果 見(jiàn)表2。根據(jù)貝賽爾公式，可計(jì)算出檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差：
　　

　　取置信水平P＝95%，自由度ν＝19，查t分布表得：
　　

　　布于X±0.043之間。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果以平衡樣結(jié)果平均值表示時(shí)，相對(duì)于對(duì)數(shù)值的取值再取反對(duì)數(shù)得其取值區(qū)間。這個(gè)取值區(qū)間適合于任何一次檢測(cè)。
　　3.3  例1：3#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為2.708，取值區(qū)間為2.665～2.751，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為462～564 cfu/g（ml），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為460～560 cfu/g（ml）。
　　例2：12#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為3.203，取值區(qū)間為3.160～3.246，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為1445～1762u/g（ml），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為1400～1800 cfu/g（ml）。
　　例3：18#樣品，對(duì)數(shù)值的平均值為4.0115，取值區(qū)間為3.9685～4.0545，取反對(duì)數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為9 300～11 337 u/g（ml），菌落總數(shù)的取值區(qū)間為9 300～11 000 cfu/g（ml）。

4 小結(jié)
　　從以上計(jì)算結(jié)果可知，由于檢驗(yàn)結(jié)果的散發(fā)性較大，如直接用貝賽爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差所得到的不確定度不適合每一個(gè)樣本。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果取對(duì)數(shù)后，用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度則使用方便，并且適合于每一個(gè)樣本。隨著檢驗(yàn)結(jié)果的不斷增加，可隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新其不確定度的取值范圍。

參考文獻(xiàn)
[1]  張霞. 微生物檢驗(yàn)中不確定度的評(píng)定[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2003，13（2）：141－142.