雷三林  趙華  馮大作  司中洲 (中南大學湘雅二醫院　湖南 長沙 410011)

【摘要】目的  探討E-cadherin和CD44V6在大腸癌患者大腸黏膜組織中的表達及其意義。方法  應用免疫組織化學標記鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶方法，對52例大腸癌患者癌組織中E-cadherin和CD44V6蛋白的表達水平進行了檢測。結果  E-cadherin和CD44V6在大腸癌組織中的表達陽性率分別為59.6%和57.7%, E-cadherin和CD44V6的異常表達與大腸癌的浸潤深度、淋巴結轉移、Dukes分期顯著相關(P<0.05)。E-cadherin蛋白高表達者3年生存率為62.3%，而低表達者為37.7% CD44V6蛋白表達陽性者5年生存率為36 .7%，而陰性者為63.3%，陽性表達者與陰性表達者生存率差別有顯著性意義(P <0.05)。E-cadherin與CD44V6蛋白的表達陽性率呈負相關(P <0.05)。結論    E-cadherin和CD44V6與大腸癌的進展和淋巴結轉移有關，可作為預測腫瘤預后的指標。
【關鍵詞】大腸癌  轉移  E-cadherin  蛋白  cd44V6  免疫組織化學
Expression and significance of E-cadherin和CD44V6 in colorectal carcinoma. LEI San-lin ZHAO Hua FENG Da-Zuo ,et al. XiangYa Second Hospital OF The Central South University , Changsha Hunan，410011 China.
【Abstract】 Objective  To investigate the expression and significance of E-cadherin (E-cad)，CD44V6in colorectal carcinoma. Methods E-cad and CD44V6 were detected by streptavidin-biotin immunohistochemical methods in 52 cases of colorectal cancer tissue. Results  The high expression rates of E-cad were 59. 6% and CD44V6 were 43. 8% in colorectal carcinoma tissue. Significant correlation existed among the abnormal expression of E-cad and CD44V6，the depth of tumor invasion，lymphnode metastasis，and Dukes stages(P<0.05). Furthermore，the abnormal expression of CD44V6 was closely associated with the grade of differentiation(P<0.05).There was a positive correlation between the expression of E-cad and CD44V6; The 5 years survival rate of patients with the high expression of E-cad  was 65.6%, those with the low expression  was 28.8%, while there was a significant different with them (p>0 .05). Conclusion  The expression of E-cad and CD44V6 were closely associated with metastasis and development  of the colorectal carcinoma. Detection of the expression of E-cad  and CD44V6 protein in colorectal cancer might served as important prognostic predictors.
【key words】colorectal carcinoma; tumor metastasis; E-cadherin protein; lmmunohistochemistry;
 
　　大腸癌是嚴重威脅人類健康和生命的常見惡性腫瘤之一。近年來，其發病率明顯增加，發病年齡提前。大腸癌的轉移是一個十分復雜的過程，涉及到多種因子的異常改變。我們應用免疫組織化學方法，檢測黏附分子E-cadherin和CD44V6蛋白在大腸癌患者中的表達，并對其與大腸癌患者臨床、病理特征和生存期的關系進行了分析，希望能對臨床治療和隨訪提供幫助。

1 對象和方法
　　1.1 對象資料  52份大腸癌標本取自1996~2000年間在我院行大腸癌切除術的患者。所有患者術前均未接受過放療和化療，均有完整的隨訪資料。年齡27~86歲，中位年齡53歲，其中男性32例，女性20例。組織學分型:高一中分化腺癌33例，低分化腺癌19，其中黏液腺癌8例;淋巴結轉移28例, 無淋巴結轉移24例。Duke分期為A 期8例、B期16、C期28例。另取20例正常大腸粘膜活檢標本作正常對照。
　　1.2檢測方法   采用免疫組織化學標記鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶方法(SP法)檢測。S-P試劑盒和鼠抗人CD44V6單克隆抗體2F10(1:70)為ONCOGENE,SCIENCE公司產品，鼠抗人E-Cad單抗(4A2C7)購自北京中山生物技術公司。染色步驟按說明書進行.以PBS代替作陰性對照。以已知陽性片作陽性對照。
　　1.3 染色結果判定方法  由兩位病理醫師對染色結果作出判定。每張切片隨機選取10個高倍視野，每個視野計數100個細胞，取其均值，CD44V6染色主要位于細胞漿及部分細胞核，呈紅色彌漫性分布， E-cadherin染色為紅色，位于細胞漿及細胞膜，細胞核很少見染色。根據染色強度及顯色細胞比例，將染色結果分為－、+、++三級。①按切片中細胞有無顯色及深淺評分，無顯色為0分、淺紅色為1分，深紅色為2分。據顯色細胞比例評分: 0%～10%為0分，11%～30%為1分，31%～70%為2分，>71%為3分。以上2種評分之和為每例的積分，按積分高低分為:0分為陰性(一)，0～2分為低表達，3～5分為高表達。
　　1.4 統計學方法　采用SPSS10.0統計軟件包進行統計學處理，計數資料用x2檢驗或Fisher’s確切概率法，等級分組資料用秩和檢驗;生存率之間的比較用Wilcoxon檢驗。

2 結果
　　2.1 E-cadherin和CD44V6在大腸癌中的表達狀況及意義　52例大腸癌中CD44V6表達陽性率57.7%(30/52)。28例轉移淋巴結中CD44V6陽性率89.3%(25/28)，其原發瘤中陽性表達為75%(21/28);無轉移者為37.5%(9/24)，CD44V6陽性表達在DukesC/D期腫瘤中高于A，B期(P<0.01)，兩者間差異有顯著性 (P <0.01)。52例大腸癌原發灶中E-cadherin高表達59.6%(31/52)，低表達40.4%(21/52)。在伴淋巴結轉移的原發瘤中E-cadherin低表達率為60.7%(17/28)，淋巴結轉移灶中低表達率為50％（14/28）而無轉移者僅為16.7%(4/24)，DukesC/D期腫瘤的E-cadherin低表達多于A，B期(P <0 .01)，兩者間有顯著性差異(P <0.01)。(圖1、圖2)。
　　2.2 不同臨床、病理特征大腸癌患者CD44V6和E-cadherin蛋白表達陽性率的比較   52例大腸癌標本中，CD44V6陽性30例，占57.7%; E-cadherin高表達31例，占59.6%。兩者的表達呈負相關(P <0.05)(表1)。兩者表達陽性率均與患者年齡、性別和腫瘤大小無關(P >0.05)，與腫瘤分化程度、淋巴結轉移狀況及DUKES分期有關(P <0.05)(表2)
　　2.3 不同CD44V6和E-cadherin蛋白表達狀況患者5年生存率比較   CD44V6蛋白表達陽性患者的5年生存率為36.7%(11/30)，CD44V6蛋白表達陰性患者5年生存率為63.6％(14/22); E-cadherin蛋白高表達患者的5年生存率67 .7%(21/31)，低表達患者為42.8%(9/21)，CD44V6陰性、E-cadherin高表達的患者5年生存率均高于CD44V6陽性、E-cadherin低表達表達者，差別有顯著性 (P<0.05)

　　　　　

3 討論
　　E-Cadherin是一種廣泛分布于上皮細胞的鈣依賴性糖蛋白。主要介導同種細胞間的黏附反應，并起細胞骨架作用。E-Cadherin是調節細胞與細胞間、細胞與基質間黏附反應的重要媒介，對維持組織結構形態起重要作用，因其可通過促進同型細胞間的黏附，使癌細胞間保持密切接觸，難以脫離原發灶進入周圍組織和脈管，被認為是一個重要的腫瘤轉移抑制基因 [1]。 近年來研究證實，E-Cadherin陽性表達的癌細胞的黏附能力強于陰性者，對陰性者E-Cadherin抗體不能產生對其黏附性的影響。E-Cadherin活性減弱可引起細胞與細胞間黏附破壞。而E-Cadherin的過度表達可引起細胞黏附性增強。E-Cadherin表達下降或缺失，細胞間的相互黏附力減弱，造成腫瘤細胞容易分散而向外浸潤性生長，脫離原發灶而發生轉移[2]。本研究發現E-Cadherin低表達的大腸癌發生淋巴結轉移高達60.7%(17/28)，可能是由于E-Cadherin的改變導致腫瘤細胞的運動能力增強這兩種因素。說明增殖力強的腫瘤細胞通過E-Cadherin的改變獲得轉移表型，促使轉移形成。與Mayor，Kanazawa等的研究一致[3,4]。但我們發現在轉移灶中E-Cadherin的表達與原發灶并不一致，與原發灶相比低表達率下降，這可能與原發灶中腫瘤細胞存在異質性有關，原發腫瘤因E-Cad表達水平下調與腫瘤轉移的啟動有關，而腫瘤在轉移灶需要保持E-Cad高表達，有利于癌細胞相互連接并形成轉移灶[4]。CD44是一種細胞表面跨膜糖蛋白，主要負責細胞與細胞間、細胞與基質間的黏附，通過其v區外顯子選擇性剪接產生多種不同的變異體，其中以含有外顯子V6的CD44變異體與腫瘤轉移的關系密切，其機理可能通過調節內皮細胞之間以及內皮細胞與細胞外基質之間的黏附和去黏附，而且還可能通過透明質酸作為信號傳導分子調控淋巴管新生過程[5,6]。本研究發現CD44表達在Duckes C/D期較A、B期高，有淋巴結轉移者較無轉移者高，表明CD44V6與大腸癌惡性進展和淋巴結轉移有關。
　　腫瘤轉移涉及多種相關因子的調控，腫瘤細胞轉移相關因子的激活和轉移抑制相關因子的失活，均可誘發腫瘤細胞轉移表型而導致轉移的發生。本研究發現CD44陽性表達和E-Cadherin低表達的大腸癌發生淋巴結轉移高達87.5%，可能是由于CD44V6分子介導了腫瘤細胞與淋巴結的特異性受體的粘附及E-Cadherin的改變導致腫瘤細胞的運動能力增強，此外CD44V6有多種生物效應，它的異常表達可擾亂E-Cadherin黏附功能，繼而發生癌細胞侵襲[7]。說明增殖力強的腫瘤細胞通過CD44V6和E-Cadherin的改變獲得轉移表型，促使轉移形成。
　　本研究發現E-Cadherin和CD44V6在大腸癌組織的表達呈負相關，E-Cad低表達、CD44V6高表達大腸癌組織分化差、DUKES分期高、淋巴結轉移發生率高、患者生存率低，本研究結果提示，E-Cadherin和CD44V6的檢測，對大腸癌患者的術式選擇、切除范圍有指導意義，并可估計大腸癌的預后，為今后開展的基因治療積累更多的臨床資料。

參考文獻
[1]  Shiozaki H，Oka H，Lnoue M，et al . E-cadherin mediated adhesio