（上海）為了對1個遺傳性抗凝血酶(AT)缺陷癥家系進(jìn)行AT抗原(AT:Ag)、活性(AT:A)和基因突變檢測并對該突變導(dǎo)致的AT結(jié)構(gòu)和功能的變化進(jìn)行研究。研究者采用免疫比濁法和發(fā)色底物法分別檢測AT:Ag和AT:A，用PCR法對先證者AT基因的7個外顯子及其側(cè)翼內(nèi)含子序列進(jìn)行擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物純化后直接測序，檢測其基因突變。根據(jù)基因檢測結(jié)果，對家系成員相應(yīng)外顯子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序。用大引物法構(gòu)建突變的AT表達(dá)質(zhì)粒并瞬時轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞內(nèi)提取物中AT:Ag。結(jié)果先證者的AT:Ag和AT:A分別為179 mg/L和42.3%，為Ⅰ型AT缺陷；AT基因測序顯示在AT外顯子6區(qū)存在G13328A雜合突變，導(dǎo)致Ala(GCC)404→Thr(ACC)。對家系成員進(jìn)行的基因測序顯示有3人(Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅲ2)存在該突變。突變質(zhì)粒在細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞內(nèi)的AT:Ag分別為正常人的40%和68%?？梢娫摷蚁禐棰裥瓦z傳性AT缺陷癥,G13328A雜合突變是導(dǎo)致先證者血栓形成的原因。 /**/