（武漢）為了構建四環素調控的含人前腦啡肽原基因(hPPE)逆轉錄病毒載體。研究者用PCR方法擴增目的基因hPPE，定向克隆入逆轉錄病毒四環素反應質粒(pRevTRE)中，酶切反應、PCR及DNA測序鑒定重組逆轉錄病毒載體pRevTRE/hPPE,在脂質體介導下分別將pRevTRE/hPPE和逆轉錄病毒四環素調節質粒(pRevTet-on)轉入包裝細胞PT67，經相應的抗生素穩定篩選得到抗性細胞克隆。RT-PCR鑒定得到陽性產病毒細胞系PT67/Tet-on和PT67/TREhPPE.用NIH3T3細胞測定病毒滴度。結果經限制性酶切分析、RT-PCR及DNA序列分析證實pRevTRE/hPPE中含有hPPE基因。轉染有pRevTet-on的PT67細胞病毒滴度為2.6×105CFU/ml，轉染有pRevTRE/hPPE的PT67細胞病毒滴度為3.2×105 CFU/ml。可見成功構建了含有受四環素調控hPPE基因的逆轉錄病毒載體，建立了能產較高滴度逆轉錄病毒的包裝細胞系，為可調控細胞移植鎮痛的研究奠定了實驗基礎。 
 /**/