（濟(jì)南）為了構(gòu)建抑制大鼠心肌細(xì)胞kir2.1基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-kir2.1，觀察對大鼠心肌細(xì)胞kir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白表達(dá)情況及搏動頻率的影響。研究者選擇5個針對大鼠心肌細(xì)胞kir2.1基因的RNA干擾(RNA mterference)位點，設(shè)計合成5對相應(yīng)的寡核苷酸鏈，形成雙鏈后依次將其連入帶有U6啟動子的載體，得到含5個目的基因的重組質(zhì)粒pEGFP6-kir2.1。轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞，并將其分為3組：實驗組、陰性質(zhì)粒對照組和空白對照組。轉(zhuǎn)染后72h，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡法(Western-blotting)檢測kir2.1mRNA和蛋白表達(dá)情況，并觀察細(xì)胞搏動頻率。結(jié)果轉(zhuǎn)染后72h，實驗組心肌細(xì)胞kir2.1 mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于兩對照組(P＜0.01)，兩對照組間比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組搏動頻率增加，并顯著高于兩對照組(P＜0.01)，兩對照組之間搏動頻率差別無統(tǒng)計學(xué)意義。可見真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-kir2.1能明顯抑制大鼠kir2.1基因的表達(dá)，提高大鼠心肌細(xì)胞的自律性。/**/