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不同RNA干預技術對人乳頭瘤病毒的沉默作用

【?2007-11-26 發布?】 臨床報道  

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    siRNA及shRNA表達載體均可在體外安全高效地沉默HPV11E7基因的表達,其干預作用存在一定的量效性和時效性,且可能存在最佳作用濃度(劑量)和最佳作用時間。 RNA干預是指一些小的雙鏈RNA可以高效、特異的阻斷體內特定基因表達,促使mRNA降解,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型。 中華皮膚科雜志5月第5期刊登一項研究,研究者化學合成1對小片段干擾RNA(siRNA-11E7)、同時構建3個短發夾狀小RNA(shRNA)表達質粒(pRNAT-11E71^#、2^#、3^#),分別轉染穩定表達HPV11E7的C57BL/6小鼠黑素瘤細胞系B16細胞株,采用實時熒光定量PCR技術檢測細胞轉染前后靶基因mRNA的表達水平。探討RNA干預技術的兩種形式在體外對人乳頭瘤病毒(HPV)11型E7基因的沉默作用。

    浙江大學醫學院附屬邵逸夫醫院皮膚科陳賢禎等研究人員研究顯示siRNA-11E7轉染細胞后6、12、24、48、72、96、120h對靶基因表達的抑制率分別為12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;最佳作用濃度為25nmol/L(抑制率70.06%),最低作用濃度可至3.13nmol/L(抑制率47.00%)。以0.4μg pRNAT-11E71^#、2^#、3^#及上述3個質粒等量混合轉染細胞72h后對靶基因表達的抑制率分別達44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,陰性質粒無干預作用。pRNAT-11E73^#作用6、12、24、48、72、96、120h對靶基因表達抑制率分別為0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51.50%、0%;最佳作用劑量0.2μg。 因此可見siRNA及shRNA表達載體均可在體外安全高效地沉默HPV11E7基因的表達,其干預作用存在一定的量效性和時效性,且可能存在最佳作用濃度(劑量)和最佳作用時間。

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