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不同RNA干預(yù)技術(shù)對(duì)人乳頭瘤病毒的沉默作用

【?2007-11-26 發(fā)布?】 臨床報(bào)道  

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    siRNA及shRNA表達(dá)載體均可在體外安全高效地沉默HPV11E7基因的表達(dá),其干預(yù)作用存在一定的量效性和時(shí)效性,且可能存在最佳作用濃度(劑量)和最佳作用時(shí)間。 RNA干預(yù)是指一些小的雙鏈RNA可以高效、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá),促使mRNA降解,誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型。 中華皮膚科雜志5月第5期刊登一項(xiàng)研究,研究者化學(xué)合成1對(duì)小片段干擾RNA(siRNA-11E7)、同時(shí)構(gòu)建3個(gè)短發(fā)夾狀小RNA(shRNA)表達(dá)質(zhì)粒(pRNAT-11E71^#、2^#、3^#),分別轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)HPV11E7的C57BL/6小鼠黑素瘤細(xì)胞系B16細(xì)胞株,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后靶基因mRNA的表達(dá)水平。探討RNA干預(yù)技術(shù)的兩種形式在體外對(duì)人乳頭瘤病毒(HPV)11型E7基因的沉默作用。

    浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院皮膚科陳賢禎等研究人員研究顯示siRNA-11E7轉(zhuǎn)染細(xì)胞后6、12、24、48、72、96、120h對(duì)靶基因表達(dá)的抑制率分別為12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;最佳作用濃度為25nmol/L(抑制率70.06%),最低作用濃度可至3.13nmol/L(抑制率47.00%)。以0.4μg pRNAT-11E71^#、2^#、3^#及上述3個(gè)質(zhì)粒等量混合轉(zhuǎn)染細(xì)胞72h后對(duì)靶基因表達(dá)的抑制率分別達(dá)44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,陰性質(zhì)粒無干預(yù)作用。pRNAT-11E73^#作用6、12、24、48、72、96、120h對(duì)靶基因表達(dá)抑制率分別為0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51.50%、0%;最佳作用劑量0.2μg。 因此可見siRNA及shRNA表達(dá)載體均可在體外安全高效地沉默HPV11E7基因的表達(dá),其干預(yù)作用存在一定的量效性和時(shí)效性,且可能存在最佳作用濃度(劑量)和最佳作用時(shí)間。

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