該項研究的目的是建立國人前列腺癌噬菌體Fab抗體片段庫，篩選、鑒定抗前列腺特異性膜抗原（PSMA）的人源Fab抗體可變區的編碼基因，為前列腺癌的診斷與基因治療研究開辟新途徑。方法采用20例前列腺癌患者外周血分離淋巴細胞，提取其總RNA，經RTPCR及半套式擴增得到免疫球蛋白全部輕鏈和重鏈Fd段基因，克隆進載體pComb3，并電轉化大腸桿菌XLl-Blue，構建前列腺癌噬菌體Fab抗體片段庫。采用噬菌體表面展示技術，以PSMA原核表達重組子pET30a（＋）-PSMA誘導表達并純化后的PSMA為固相抗原，從噬菌體Fab抗體庫中經過“吸附洗脫擴增”篩選過程，獲得抗原結合活性和特異性較強的PSMA人源Fab可變區抗體基因片段的陽性克隆，并進行免疫檢測及序列測定。結果成功構建前列腺癌噬菌體抗體Fab片段庫，其輕鏈及重鏈Fd段與載體DNA的重組率分別為87％、79％，庫容為2．32×10^7，滴度為8．7×10^13pfu／ml。篩選得到Fab抗體克隆的Fd段基因核苷酸序列為696bp，編碼由232個氨基酸殘基組成的多肽，與人免疫球蛋白γ鏈恒定區的同源性為98％；輕鏈κ基因核苷酸序列為630bp，編碼由210個氨基酸殘基組成的多肽，與κ鏈恒定區同源性為93％。由此得出結論成功構建了前列腺癌噬菌體抗體庫，并獲得了PSMA人Fab抗體可變區編碼基因克隆，該克隆抗體基因具有典型的免疫球蛋白輕鏈和重鏈可變區的結構特點，基因編碼產物具有與PSMA反應的免疫學活性和特異性。/**/