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纖溶酶原激活物抑制劑-1小干擾RNA對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)特性的

【?2008-08-14 發(fā)布?】 臨床報(bào)道  

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    該項(xiàng)研究目的是研究化學(xué)合成纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)小干擾RNA(siRNA)對(duì)肝星狀細(xì)胞(HSC)PAI-1基因表達(dá)及生物學(xué)特性的影響。方法采用將化學(xué)合成抗PAI-1 siRNA以Lipofectamine包裹,轉(zhuǎn)染HSC―T6細(xì)胞,設(shè)陰性對(duì)照和空白對(duì)照,抽提細(xì)胞總RNA及蛋白質(zhì),收集培養(yǎng)上清液,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和免疫細(xì)胞熒光法檢測(cè)細(xì)胞PAI―1表達(dá)。應(yīng)用MTT法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原含量。結(jié)果轉(zhuǎn)染siRNA的HSC―T6細(xì)胞PAI-1基因表達(dá)水平明顯下調(diào),HSC―T6細(xì)胞增殖抑制明顯,48h和72h時(shí)培養(yǎng)上清液中Ⅰ型膠原表達(dá)水平顯著減少,分別比陰性對(duì)照下降(20.71±8.40)%和(37.97±6.40)%(F=42.69。P=0.0001),Ⅲ型膠原含量于72h時(shí)降低(35.98±4.60)%(F=105.52,P=0.0001)。由此得出結(jié)論化學(xué)合成抗PAI-1 siRNA能高效抑制HSC―T6PAI-1表達(dá),抑制HSC―T6細(xì)胞增殖,顯著減少Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成和分泌,具有預(yù)防及治療肝纖維化的潛力。/**/
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