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大鼠角膜堿燒傷后差異表達基因的變化及相應基因克隆 【?2006-04-24 發布?】 臨床報道
(哈爾濱)為了探討大鼠角膜堿燒傷后差異基因表達情況,克隆目的基因片段并了解其同源性,檢測有無新基因產生,從分子角度闡明角膜堿燒傷后變性蛋白產生的分子生物學基礎。研究者采用異硫氰酸胍法提取大鼠角膜堿燒傷后3 d和2周的角膜RNA,合成雙鏈cDNA。分別以正常角膜和堿燒傷角膜的cDNA為模板,應用2種錨定引物和12種隨機引物,進行24種不同引物組合的差異顯示反轉錄聚合酶鏈反應(DDRT-PCR),對目的基因進行克隆、克隆鑒定、測序及同源性分析。結果在相同PCR反應條件下,同正常角膜相比,堿燒傷2周的角膜產生1條差異性條帶,分子量為630 bp。對該片段進行克隆和測序,并與Gene Bank進行同源性的比較,發現該基因與大鼠線粒體細胞色素C氧化酶的亞單位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的基因具有部分同源性。可見大鼠堿燒傷2周的角膜有差異基因產生,與大鼠線粒體細胞色素C氧化酶的亞單位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ具有部分同源性。該差異基因的產生可能與角膜堿燒傷后超氧自由基的作用有關。 /**/
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