近日，第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院臨床實驗科采用克隆技術(shù)，研究出一項“人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄（hTERT）基因核心啟動子調(diào)控的人單純皰疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韋（HAS-tk/GCV）系統(tǒng)宮頸癌細胞（HeLa）特異性治療”新技術(shù)，該技術(shù)對體外HeLa具有明顯的殺傷作用。

    據(jù)介紹，宮頸癌是一種死亡率較高的惡性腫瘤，傳統(tǒng)治療方法以手術(shù)、化療及放療為主，但患者生存率仍不理想。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，自殺基因療法在腫瘤治療中獲得了一定成功?？蒲腥藛T已經(jīng)證明，抑制端粒酶的活性能明顯抑制腫瘤生長，甚至迫使癌細胞自殺。hTERT基因在90%的人類腫瘤組織中呈過表達，具有明顯的腫瘤特異性。

    為探討hTERT基因?qū)eLa特異性治療的新方法，研究人員采用克隆技術(shù)，構(gòu)建hTERT基因啟動子調(diào)控的胸苷激酶基因（tk）真核表達載體pCI-neo/hTERT-tk，分別用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HeLa和正常血管內(nèi)皮細胞（ECV304），并通過克隆擴增后，用RT-PCR法檢測tk基因的表達情況，用流式細胞術(shù)檢測hTERT調(diào)控的HSV-tk/GCV系統(tǒng)對宮頸癌細胞及血管內(nèi)皮細胞的殺傷作用。

    檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在重組質(zhì)粒pCI-neo/hTERT-tk中，出現(xiàn)與tk基因大小相符的約為1100bp的條帶；HeLa細胞轉(zhuǎn)染pCI-neo/hTERT-tk質(zhì)粒后，可測到tk基因陽性表達，而正常的ECV304細胞轉(zhuǎn)染后則無tk細胞表達；HeLa細胞凋亡率為36.7%，ECV304細胞凋亡率為5.2%，兩組相比有顯著性差異（P<0.01）。同時，HeLa細胞S期所占比例為11.9%，而ECV304細胞S期所占比例高達32.7%（P<0.01）。提示hTERT在惡性腫瘤中陽性表達率高，在正常細胞中低表達或不表達。

    研究人員認為，hTERT基因是決定端粒酶活性的重要組成部分，只有在端粒酶表達陽性的腫瘤細胞中，hTERT基因啟動子才發(fā)揮作用，使tk基因得到表達；同樣，只有在腫瘤細胞中得到表達的tk基因產(chǎn)生的tk酶，才可將更昔洛韋（GCV）轉(zhuǎn)化為細胞毒物，抑制DNA的合成和復制，導致細胞凋亡。同時，hTERT-tk基因在正常細胞中，無論是轉(zhuǎn)染前還是轉(zhuǎn)染后均無法引起明顯的細胞凋亡這一結(jié)果表明，hTERT-tk/GCV系統(tǒng)僅特異于腫瘤細胞，從而實現(xiàn)了腫瘤因治療特異性這一根本目的。