中國醫科大學附屬第一醫院呼吸疾病研究所
溫華 康健 鄭 銳 侯顯明 于潤江

樹突狀細胞（DC）是免疫系統主要的抗原提呈細胞（APC），其在固有免疫反應和適應性免疫方應中均有重要作用。但就肺腺癌而言，其抗原刺激DC 成熟的最佳方式尚不完全清楚。用凋亡（1.33μmol/L 順鉑所致）以及（熱休克、反復凍融和5.32μmol/L 順鉑所致）壞死的肺腺癌A549 細胞作為腫瘤相關抗原（TAA），分別刺激人外周血單核細胞來源的DC（mo-DC）。通過比較凋亡和壞死的A549細胞對mo-DC 表型、超微結構和白介素（IL）-12 分泌量的影響，來評估二者對誘導mo-DC 成熟能力的影響。體外誘導DC，并用不同實驗條件下所得的TAA 負載于DC；流式細胞術測定DC 表面標志，電鏡觀察DC 形態和超微結構，ELISA 法測定IL-12 分泌量；流式細胞術和Hoechst 染色判定A549細胞凋亡。

結果顯示：

（1）順鉑濃度為1.33μmol/L 時，A549 細胞凋亡率可達19.7%，細胞大多被阻滯在G1 期；順鉑濃度為5.44μmol/L 時，A549 細胞幾乎全部死亡。

（2）掃描電鏡下可見DC 伸展出大量大小不一的胞質突起，其末端圓鈍且細胞膜光滑無皺折。成熟的DC（ mDC）體積大于不成熟的DC（iDC），但表面突起較iDC 減少。

（3）透射電鏡下可見DC 的胞體周圍有不規則突起和褶皺；胞核染色深，偏向一側，形狀不規則，多為分葉狀核內異染色質沿核邊高度凝聚；胞質線粒體較為豐富，較多吞飲大泡及小泡。

（4）人DC 特異性表面標志CD1a 為68.7%。不同實驗條件（L-DC、H-DC、A-DC 和N-DC）刺激下DC 的表面標志 HLA-DR 分別為6.98%、34.12%、39.49%、19.13%，CD80分別為11.2%、40.55%、54.33%、49.76%。A-DC 的表面標志HLA-DR 顯著高于L-DC 和N-DC 的表達（P＜0.01），但與H-DC 表達相近（P＞0.05）；A-DC 與N-DC 表面均高表達CD80，雖然前者略高于后者，但二者間無統計學意義（P＞0.05）。

（5）DC 和L-DC 僅能分泌少量IL-12，其細胞上清濃度低于20 pg/ml；H-DC、N-DC 和A-DC 分泌IL-12 的能力增強，其細胞上清濃度分別為（201.5± 30.3）、（41.2± 5.9）和（289.7± 45.2）pg/ml。N-DC 的 IL-12 分泌量較DC 和L-DC 有增加，H-DC 和A-DC的IL-1 2 分泌量均明顯增加，與其余各組間有統計學意義（P＜0 .01），其中尤以A-DC 的IL-12 分泌量最高，與H-DC 間有統計學意義（P＜0 .05）。

結果表明順鉑所致凋亡的A549 細胞能刺激DC成熟。