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核糖核酸干擾下調骨橋蛋白表達對胃癌細胞生物學行為的影響

【?2008-03-27 發布?】 臨床報道  

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    研究目的是探討骨橋蛋白(OPN)下調對胃癌細胞株MKN28和SGC7901生物學行為的影響。方法采用參考相關文獻,設計并合成OPN的小干擾RNA(siRNA),通過熒光標記測定2株細胞的轉染效率。Western印跡法檢測OPN蛋白下調情況。實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測siRNA對OPNmRNA的下調率及隨時間的變化。

    流式細胞儀檢測轉染前、后細胞周期和凋亡變化。四甲基偶氮唑藍(MTT)法連續7d檢測OPN干擾時腫瘤細胞增殖的變化,并采用混合模型進行統計分析。Transwell實驗檢測轉染前、后細胞的運動侵襲能力并行t檢驗進行分析。結果2株細胞中OPN siRNA的轉染效率均在90%以上。干擾后2株細胞中OPN蛋白表達均下調。SGC7901細胞在siRNA轉染后72hOPN mRNA表達下降最低,達47%;MKN28細胞在siRNA轉染后48hOPN mRNA表達下降最低,達40%。OPN被干擾后,SGC7901和MKN28細胞的增殖能力明顯減弱(混合模型分析與未干擾組比較,P〈0.01)。OPN被干擾后MKN28和SGC7901細胞周期受到影響,其中SGC7901分裂期細胞比例由18.78%降至17.02%,MKN28分裂期細胞比例則由4.96%降至0.39%。2株細胞都未發現下調OPN后誘發細胞凋亡。OPN下調后2株腫瘤細胞的運動侵襲能力均下降,穿過人工基底膜的細胞數明顯減少(SGC7901:t=5.172,P〈0.01;MKN28:t=11.365,P〈0.01)。由此得出結論,siRNA能下調MKN28和SGC7901中OPN表達,OPN可能與MKN28和SGC7901細胞的增殖和運動侵襲相關。

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