研究目的是探討骨橋蛋白(OPN)下調(diào)對(duì)胃癌細(xì)胞株MKN28和SGC7901生物學(xué)行為的影響。方法采用參考相關(guān)文獻(xiàn),設(shè)計(jì)并合成OPN的小干擾RNA(siRNA),通過熒光標(biāo)記測(cè)定2株細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。Western印跡法檢測(cè)OPN蛋白下調(diào)情況。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)siRNA對(duì)OPNmRNA的下調(diào)率及隨時(shí)間的變化。
流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前、后細(xì)胞周期和凋亡變化。四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法連續(xù)7d檢測(cè)OPN干擾時(shí)腫瘤細(xì)胞增殖的變化,并采用混合模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前、后細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)侵襲能力并行t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。結(jié)果2株細(xì)胞中OPN siRNA的轉(zhuǎn)染效率均在90%以上。干擾后2株細(xì)胞中OPN蛋白表達(dá)均下調(diào)。SGC7901細(xì)胞在siRNA轉(zhuǎn)染后72hOPN mRNA表達(dá)下降最低,達(dá)47%;MKN28細(xì)胞在siRNA轉(zhuǎn)染后48hOPN mRNA表達(dá)下降最低,達(dá)40%。OPN被干擾后,SGC7901和MKN28細(xì)胞的增殖能力明顯減弱(混合模型分析與未干擾組比較,P〈0.01)。OPN被干擾后MKN28和SGC7901細(xì)胞周期受到影響,其中SGC7901分裂期細(xì)胞比例由18.78%降至17.02%,MKN28分裂期細(xì)胞比例則由4.96%降至0.39%。2株細(xì)胞都未發(fā)現(xiàn)下調(diào)OPN后誘發(fā)細(xì)胞凋亡。OPN下調(diào)后2株腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)侵襲能力均下降,穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少(SGC7901:t=5.172,P〈0.01;MKN28:t=11.365,P〈0.01)。由此得出結(jié)論,siRNA能下調(diào)MKN28和SGC7901中OPN表達(dá),OPN可能與MKN28和SGC7901細(xì)胞的增殖和運(yùn)動(dòng)侵襲相關(guān)。
/**/