6月16日消息，中國研究者分析了HIV Tat融合后對融合蛋白生物學活性的影響，探討HIV Tat的生物細胞膜穿透功能和意義。

研究者以胸腺激酶（TK）基因為報告基因，將不同長度的甘氨酸（Gly）密碼子融合在HIV Tat與TK基因之間以及兩種基因倒置融合，分別克隆至PBK原核表達載體，大腸埃希菌表達，異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導，超聲波破碎后，經耦聯Tat蛋白單克隆抗體的層析柱層析收集。融合蛋白與HepG2細胞共培養，24h后間接免疫熒光檢測。加用更昔洛韋，3d后錐蟲藍染色計算細胞死亡率，流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率。

結果克隆出含有不同甘氨酸密碼子的HIVTat—Gly（n）-TK（n=0，2，4，6）融合基因，成功表達Tat—TK系列融合蛋白和TK—Tat融合蛋白。間接免疫熒光檢測發現Tat—TK系列融合蛋白與Tat蛋白、TK—Tat融合蛋白透過膜效率相似；但流式細胞儀檢測表明，在培養基含有更昔洛韋的條件下，Tat—Gly（4）一TK、Tat—Gly（6）一TK、Tat—Gly（2）-TK、Tat—TK融合蛋白、HIVTat組和TK—Tat致HepG2細胞凋亡率分別為14．77％、4．30％、12．69％、3．OO％、1．03％和4．40％。錐蟲藍染色發現細胞死亡率也有類似結果，分別為80．2％、56．7％、65．4％、58．4％、9．1％和57．1％，組間比較差異有統計學意義（P〈0．05），但TK—Tat和Tat—TK融合蛋白組之間差異無統計學意義（P=0．24）。

由此，研究者得出結論，Tat與TK基因之間融合甘氨酸密碼子的數目對融合蛋白中Tat的細胞融合穿透功能不產生影響，而對TK的體外細胞致死作用有較大影響，其中間隔4個甘氨酸密碼子對融合蛋白TK體外細胞致死作用的影響最小，同時TK基因與HIVTat的倒置融合不影響兩者生物學功能。