7月17日消息，中國(guó)研究者構(gòu)建人前列腺特異性抗原（hPSA）啟動(dòng)子調(diào)控的趨化因子受體4（CXCR4）的RNA干擾逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，并探討其對(duì)激素依賴性前列腺癌LNCaP細(xì)胞CXCR4基因表達(dá)的靶向抑制作用。

研究者通過(guò)PCR擴(kuò)增CXCR4特異性小干擾RNA（siRNA），轉(zhuǎn)入帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）和啟動(dòng)子u6的pGensil-1質(zhì)粒，以hPSA啟動(dòng)子代替U6啟動(dòng)子，再將重組基因片段導(dǎo)入到逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達(dá)載體pLXSN中，進(jìn)行限制性酶切鑒定。轉(zhuǎn)染PA317包裝細(xì)胞，收獲病毒上清，分別轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞PC-3m、LNCaP和人乳腺癌細(xì)胞MCF7。采用RT-PCR、Westernblot檢測(cè)CXCR4基因表達(dá)。Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞體外侵襲能力的變化。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)限制性酶切鑒定該重組質(zhì)粒，成功構(gòu)建了CXCR4的RNA干擾質(zhì)粒pLXSN／EGFP—hPSA-siCXCR4。與空載體組比較，CXCR4-siRNA對(duì)LNCaP細(xì)胞CXCR4mRNA和蛋白表達(dá)抑制顯著，48h抑制率分別為（81．53±10．22）％和（90．52±9．31）％；對(duì)PC-3m、MCF-7細(xì)胞CXCR4mRNA和蛋白表達(dá)無(wú)抑制作用。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LNCaP細(xì)胞干擾組微膜下孔細(xì)胞數(shù)為（139．9±14．2）個(gè)，空載體組為（348．4±36．4）個(gè)，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0．05）；PC-3m、MCF-7細(xì)胞干擾組微膜下孔細(xì)胞數(shù)與空載體組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0．05）。

由此，研究者得出結(jié)論，該逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)中，hPSA啟動(dòng)子調(diào)控的下游RNA干擾序列特異性地抑制激素依賴前列腺腫瘤細(xì)胞的CXCR4基因表達(dá)，具有明顯的靶向性。hPSA啟動(dòng)子調(diào)控的靶向CXCR4基因的RNA干擾技術(shù)在激素依賴性前列腺癌的基因治療中具有一定價(jià)值。