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研究者探討人前列腺特異性抗原啟動子調控的CXCR4-siRNA逆轉錄病毒載體的構建及其對前列腺癌細胞

【?2009-07-16 發布?】 臨床報道  

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7月17日消息,中國研究者構建人前列腺特異性抗原(hPSA)啟動子調控的趨化因子受體4(CXCR4)的RNA干擾逆轉錄病毒載體,并探討其對激素依賴性前列腺癌LNCaP細胞CXCR4基因表達的靶向抑制作用。

研究者通過PCR擴增CXCR4特異性小干擾RNA(siRNA),轉入帶有增強型綠色熒光蛋白(EGFP)和啟動子u6的pGensil-1質粒,以hPSA啟動子代替U6啟動子,再將重組基因片段導入到逆轉錄病毒真核表達載體pLXSN中,進行限制性酶切鑒定。轉染PA317包裝細胞,收獲病毒上清,分別轉染前列腺癌細胞PC-3m、LNCaP和人乳腺癌細胞MCF7。采用RT-PCR、Westernblot檢測CXCR4基因表達。Transwell小室侵襲實驗檢測前列腺癌細胞體外侵襲能力的變化。

結果發現通過限制性酶切鑒定該重組質粒,成功構建了CXCR4的RNA干擾質粒pLXSN/EGFP—hPSA-siCXCR4。與空載體組比較,CXCR4-siRNA對LNCaP細胞CXCR4mRNA和蛋白表達抑制顯著,48h抑制率分別為(81.53±10.22)%和(90.52±9.31)%;對PC-3m、MCF-7細胞CXCR4mRNA和蛋白表達無抑制作用。Transwell侵襲實驗結果顯示,LNCaP細胞干擾組微膜下孔細胞數為(139.9±14.2)個,空載體組為(348.4±36.4)個,兩組差異有統計學意義(P〈0.05);PC-3m、MCF-7細胞干擾組微膜下孔細胞數與空載體組比較,差異無統計學意義(P〉0.05)。

由此,研究者得出結論,該逆轉錄病毒系統中,hPSA啟動子調控的下游RNA干擾序列特異性地抑制激素依賴前列腺腫瘤細胞的CXCR4基因表達,具有明顯的靶向性。hPSA啟動子調控的靶向CXCR4基因的RNA干擾技術在激素依賴性前列腺癌的基因治療中具有一定價值。

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