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利用體內噬菌體展示技術篩選肝癌組織特異性結合肽 【?2006-06-30 發布?】 臨床報道
(上海)為了篩選人源肝癌組織特異性結合短肽。研究者體外培養人源肝癌細胞株BEL-7402,建立荷瘤裸鼠模型。尾靜脈注射噬菌體12肽文庫至荷瘤裸鼠體內,循環20 min后回收腫瘤組織中噬菌體,同時取正常對照組織進行噬菌體效價測定和免疫組化觀察。將回收的噬菌體擴增、純化,并以此作為起始物進行下一輪篩選。經過3輪體內篩選,得到與肝癌組織或細胞特異結合的肽段。隨機挑選噬菌體單克隆進行測序,分析序列同源性后進行體外細胞酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和體內回輸實驗,驗證噬菌體克隆的導向性。結果經過3輪體內篩選,瘤組織中噬菌體的回收率逐步提高,回收量隨著輸入量的增加迅速增加,而每輪篩選肝組織中的噬菌體回收量始終保持在一個恒定范圍,并不隨輸入量的增加而增加。免疫組化結果顯示,第3輪篩選后,瘤組織中的噬菌體得到高水平富集,同時其他組織的非特異性結合降至最低。肝癌細胞特異性結合最強的是A54號單克隆,A67、B2號單克隆次之。B2的導向效果最好,A54次之。通過對噬菌體單克隆的序列分析,初步確定了PSS/PTT基序。可見利用體內噬菌體展示技術,可以成功篩選到與肝癌細胞或組織特異結合的噬菌體肽。/**/
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