（南京）為了構(gòu)建BRAF基因序列特異性的短發(fā)卡RNA(shRNA)質(zhì)粒載體，檢測其對人黑素瘤細胞BRAF基因的干擾作用。研究者設(shè)計2條BRAF基因序列特異性的shRNA編碼序列和1條非特異性陰性對照序列，插入質(zhì)粒pGenesil-1，雙酶切和測序鑒定。用構(gòu)建成功的3條質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人黑素瘤細胞株A375和M14，分別采用RT-PCR和蛋白印跡檢測其BRAF基因的mRNA和蛋白表達。結(jié)果 所設(shè)計的shRNA序列被正確插入質(zhì)粒pGenesil-1。非特異性對照質(zhì)粒neg對黑素瘤細胞BRAF基因表達不產(chǎn)生干擾，2條序列特異性質(zhì)粒braf 1和braf2抑制了BRAF基因mRNA和蛋白的表達，其中braf 1干擾效果最為明顯，最高抑制率可達90%。可見 質(zhì)粒介導的shRNA可成功干擾人黑素瘤細胞BRAF基因的表達，其抑制時間可持續(xù)至少1個月。/**/