（南京）為了構建BRAF基因序列特異性的短發卡RNA(shRNA)質粒載體，檢測其對人黑素瘤細胞BRAF基因的干擾作用。研究者設計2條BRAF基因序列特異性的shRNA編碼序列和1條非特異性陰性對照序列，插入質粒pGenesil-1，雙酶切和測序鑒定。用構建成功的3條質粒轉染人黑素瘤細胞株A375和M14，分別采用RT-PCR和蛋白印跡檢測其BRAF基因的mRNA和蛋白表達。結果 所設計的shRNA序列被正確插入質粒pGenesil-1。非特異性對照質粒neg對黑素瘤細胞BRAF基因表達不產生干擾，2條序列特異性質粒braf 1和braf2抑制了BRAF基因mRNA和蛋白的表達，其中braf 1干擾效果最為明顯，最高抑制率可達90%。可見 質粒介導的shRNA可成功干擾人黑素瘤細胞BRAF基因的表達，其抑制時間可持續至少1個月。/**/