中南大學湘雅醫學院生理學系（410078）向 陽 劉 持 譚宇蓉 劉惠君 秦曉群

哮喘時氣道上皮損傷和脫落是哮喘的一個重要病理學特征。近年來隨著對哮喘發病機制的深入研究，對上皮在氣道疾病尤其是哮喘中的作用已經形成新的認識，即支氣管上皮通過分泌炎癥介質、細胞因子和生長因子等主動參與哮喘的氣道炎癥和重塑過程，并與哮喘的病理生理表現如氣道阻塞和氣道高反應密切相關。本實驗采用上述原理，以臭氧應激損傷動物氣道上皮細胞，建立哮喘動物模型。

實驗選用雌性、清潔級、6～8 周齡BALB/c 小鼠，按隨機數字表法分為正常對照組和臭氧應激組。應激組動物置于40cm×30cm×25cm 塑料箱內，2.0ppm 臭氧與新鮮空氣混合導入箱中，臭氧應激4天，每天30min。正常對照組于相同環境下吸入新鮮空氣。于末次應激后12h 檢測氣道阻力（RL），動態肺順應性（Cdyn），肺泡灌洗液中細胞計數、分類，總蛋白含量測定，肺、支氣管病理切片等指標證實模型的可靠性。理想的哮喘動物模型至少具備氣道高反應性及氣道炎癥兩大特點。氣道阻力增加是哮喘的主要病理生理特征，阻塞發生在較大支氣管時更為明顯。而大多數研究報告認為，哮喘發作期間動態順應性常見下降，且呈明顯的頻率依賴性，與小氣道阻塞相關。本實驗利用Buxco 小動物呼吸功能檢測系統檢測小鼠的氣道反應性，結果發現：（1）測定模型組的氣道阻力（RL）在組胺激發前后均高于對照組，而動態肺順應性（Cdyn）在組胺激發前后均低于對照組。提示臭氧應激所致氣道上皮損傷可明顯增加氣道反應性，并導致大、小氣道不同程度的不可逆氣道阻塞及肺功能下降。（2）模型組小鼠氣道呈變應性炎癥反應，并且表現為不同類型的炎癥細胞浸潤，并可見支氣管上皮細胞脫落，肺動靜脈周圍水腫及呼吸性細支氣管阻塞，符合哮喘的病理學形態。

綜上所述，用臭氧連續攻擊4 天可復制成哮喘小鼠模型。經氣道阻力、動態肺順應性、肺泡灌洗液內細胞及病理一系列檢測證實哮喘模型的成功，可用于實驗研究。與傳統的OVA 致敏的哮喘模型相比，本模型的著眼點在于氣道上皮對氣道免疫、炎癥和重塑反應的調控。GINA 方案曾明確指出，支氣管上皮功能不良在哮喘發病機理中的作用和IgE 介導的機制同等重要。因此，對支氣管上皮細胞的研究是揭示哮喘發病機制的新途徑之一，應予關注。本模型方法操作簡便可行，建模周期短，為哮喘機制特別是氣道上皮功能的研究提供了客觀有效的手段。