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TβR-Ⅱ-RANTES融合基因重組腺病毒的抗腫瘤作用

【?2008-04-24 發布?】 臨床報道  

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    目的 構建表達融合基因TGF-βⅡ型受體(TβR―Ⅱ)胞外區及活化T細胞表達和分泌的調節因子(RANTES)重組腺病毒載體,并觀察其抗腫瘤作用。方法 RT―PCR擴增小鼠TβR―Ⅱ胞外區和RANTES基因,重疊PCR擴增融合基因TβR-Ⅱ胞外區?RANTES。采用adMax adenovirus vectorcreation試劑盒構建表達融合基因重組腺病毒。體外感染小鼠肺腺癌LA795細胞系,繪制細胞生長曲線。采用Westernblot法檢測感染后細胞融合基因的表達;酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測其培養上清的蛋白含量;Annexin V―FITC法檢測感染后細胞的凋亡;并觀察感染后細胞培養上清對小鼠脾細胞的趨化作用。將感染后的細胞(1×10^5個)接種于T739小鼠,觀察成瘤時間和生存時間;1×10^10pfu的重組腺病毒局部注射荷瘤小鼠,觀察腫瘤的大小變化,并統計腫瘤的重量和計算抑瘤率。結果經測序證實,RT―PCR正確擴增小鼠TβR―Ⅱ胞外區和RANTES基因,重疊PCR正確擴增融合基因TβR-Ⅱ胞外區.RANTES。重組質粒pDC316-融合基因經酶切鑒定正確,與pJM17雙質粒共轉染獲得表達融合基因重組腺病毒,病毒滴度為8×10^10pfu/ml。 Westernblot結果表明,感染后的LA795細胞有融合蛋白的特異性條帶出現;培養上清中,游離TGF―β1的水平顯著減低,而RANTES的水平顯著升高。感染融合基因重組腺病毒的細胞生長速度明顯減低,凋亡率為16.9%;培養上清可趨化小鼠脾細胞,與對照組之間差異均有統計學意義。感染融合基因重組腺病毒組與對照組相比,體內成瘤時間和生存時間明顯延長;局部注射融合基因重組腺病毒可顯著抑制腫瘤的生長,抑瘤率為37.6%。結論成功構建表達融合基因TβR-Ⅱ胞外區-RANTES重組腺病毒可有效結合TGF―β1,顯著逆轉TGF-β介導的免疫抑制狀態,高水平表達RANTES強化腫瘤局部的免疫功能,具有顯著的抗腫瘤作用/**/
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