該項研究目的是構(gòu)建屎腸球菌透明質(zhì)酸酶（hyaluronidase，hyl）基因重組表達(dá)質(zhì)粒，在大腸埃希菌中表達(dá)獲得重組蛋白，探討Hy1蛋白經(jīng)口服免疫小鼠后，機體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。方法采用PCR擴(kuò)增hyl基因片段，克隆至pQE-30質(zhì)粒上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pQE-hyl，轉(zhuǎn)化E，coli DH5α，經(jīng)異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白Hy1；Western印跡分析其免疫反應(yīng)性。融合蛋白經(jīng)鎳離子柱純化后，Hy1和屎腸球菌全菌蛋白TX0016分別給小鼠灌胃進(jìn)行免疫，ELISA法檢測小鼠血清IgG、IgA、小腸黏液sIgA和糞便sIgA。用TX0016進(jìn)行腹腔攻擊已免疫的小鼠，觀察其免疫保護(hù)性。結(jié)果經(jīng)測序hyl基因全長1662bp，為編碼553個氨基酸殘基的多肽。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS―PAGE）分析相對分子質(zhì)量約為60000?？扇苄员磉_(dá)占全菌的38％以上，經(jīng)親和層析后可獲得純度為92％以上的重組蛋白。Western印跡證實了其免疫反應(yīng)性。灌胃免疫小鼠后，ELISA法檢測結(jié)果Hy1組血清IgA、IgG、糞sIgA、腸黏液sIgA分別為0．365±0．048、0，431±0，064、0．743±0，056和1．112±0．113，對照組則分別為0，051±0．013、0．098±0．019、0．102±0，032和0，187±0，051，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P〈0．01）。用半數(shù)致死量（I，D50）的細(xì)菌量攻擊后，Hy1免疫組小鼠的存活率為70％，而對照組為50％。由此得出結(jié)論融合蛋白Hy1經(jīng)口服免疫可有效誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答，產(chǎn)生高水平的sIgA，發(fā)揮局部黏膜免疫作用。/**/