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應用干擾RNA體外抑制嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒N基因的表達

【?2005-11-24 發布?】 臨床報道  

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(重慶)為了構建綠色熒光蛋白(GFP)與嚴重急性呼吸綜合征(SARS)冠狀病毒 N蛋白的融合表達載體pEGFP-C1-N以及針對SARS冠狀病毒 N基因的小發卡型shRNA表達載體pshRNA-N,觀察shRNA對SARS冠狀病毒 N基因復制和表達的影響,研究者將構建成功的pEGFP-C1-N與psh RNA-N共轉染293細胞,于轉染后24、48、72 h觀察GFP表達的強弱,采用Western Blot分別檢測GFP與N蛋白的表達,逆轉錄PCR檢測N基因的mRNA。結果 pshRNA-N作用組綠色熒光強度明顯弱于未干擾組,Western Blot和逆轉錄PCR結果也證實pshRNA-N對N基因和N蛋白的表達有明顯抑制作用,而無關序列的shRNA無此作用。可見針對SARS冠狀病毒 N基因的shRNA具有顯著和特異的抑制N蛋白表達的作用。 /**/
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