（武漢）為了構建人TIM-3融合蛋白原核表達載體，獲取蛋白質抗原，制備抗人TIM-3單克隆抗體。研究者通過特異性引物從人外周血單個核細胞中擴增出hTIM-3 cDNA，細胞膜外基因克隆到原核表達載體pQE100S中，轉化到E.coli BL21(DE3)，表達并純化帶6個組氨酸的融合蛋白，免疫BALB/c小鼠，應用雜交瘤技術經克隆篩選獲得抗人TIM-3單抗的雜交瘤細胞株，以間接酶鏈反應吸附測定(ELISA)和Western Blot等方法進行單克隆抗體的鑒定。結果人TIM-3 cDNA經DNA測序得到證實，成功構建了pQE100S-hTIM-3原核表達載體，表達并純化了大量蛋白質抗原，獲得了1株穩定分泌抗人TIM-3單抗的雜交瘤細胞株(28H12)，Western Blot分析證明hTIM-3蛋白在轉染的CHO細胞中高表達。可見成功構建了人TIM-3融合蛋白原核表達載體，表達并純化了6×His-hTIM-3融合蛋白，所獲單抗能特異識別人TIM-3蛋白，為進一步研究人TIM-3及其配體的功能提供了條件。/**/