（上海）為了獲得具有生物學(xué)活性的結(jié)核分枝桿菌重組異檸檬酸裂解酶蛋白。研究者以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組為模板，擴(kuò)增該菌株的異檸檬酸裂解酶基因icl，克隆入原核表達(dá)載體pET-28a(+)中，通過(guò)在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)，獲得以鎳離子螯合型瓊脂糖凝膠親和層析柱純化的重組蛋白，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定分析。結(jié)果純化出具有生物學(xué)活性的重組結(jié)核分枝桿菌異檸檬酸裂解酶.酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定分析表明，重組異檸檬酸裂解酶ICL的比活力為7.657×102 μmol·mg-1·min-1，反應(yīng)最適pH值約為7.4。重組蛋白經(jīng)高效液相色譜及質(zhì)譜鑒定，測(cè)得相對(duì)分子質(zhì)量為50 603.347。在5 mmol/L Tris-Cl緩沖液、pH值7.8、25 ℃條件下，重組ICL的二級(jí)結(jié)構(gòu)中相對(duì)有43.8 %的α螺旋、31.9%的β折疊、3.4%β轉(zhuǎn)角、20.9 %無(wú)規(guī)則卷曲。可見(jiàn)本研究成功克隆表達(dá)結(jié)核分枝桿菌H37Rv異檸檬酸裂解酶基因，酶學(xué)性質(zhì)鑒定獲得了具有生物學(xué)活性的重組蛋白，為該酶免疫學(xué)研究及新型抗結(jié)核藥物的篩選奠定了基礎(chǔ)。/**/