（湛江）為了構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌抗原ESAT-6的真核表達(dá)質(zhì)粒，并研究其免疫原性。研究者采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法自結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組DNA中擴(kuò)增esat-6基因片段，定向亞克隆入真核表達(dá)載體pVAC，構(gòu)建pVAC-esat-6重組質(zhì)粒,利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，將其導(dǎo)入Vero E6細(xì)胞，RT-PCR法檢測(cè)mRNA表達(dá)情況，Western-blot法鑒定表達(dá)產(chǎn)物；重組質(zhì)粒經(jīng)基因槍免疫小鼠后，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)小鼠血清抗ESAT-6特異性抗體以及小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液干擾素-γ(IFN-γ)含量。結(jié)果成功構(gòu)建了真核表達(dá)重組質(zhì)粒pVAC-esat-6，并可在VeroE6細(xì)胞中表達(dá)；重組質(zhì)粒免疫小鼠3次后，抗體滴度達(dá)到了1:1600，重組質(zhì)粒組(pVAC-esat-6組)小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ水平明顯高于對(duì)照組(pVAC組)(P＜0.01)。可見(jiàn)成功構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌抗原ESAT-6的真核表達(dá)質(zhì)粒pVAC-esat-6，免疫小鼠后誘導(dǎo)產(chǎn)生了特異的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。/**/