該項(xiàng)研究目的是在真核生物酵母細(xì)胞中表達(dá)乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5（PS1TP5）。方法采用以HepG2細(xì)胞來源的mRNA為模板，經(jīng)RT-PCR法擴(kuò)增PS1TP5基因，克隆到pGEM-T載體中，并測(cè)序鑒定，酶切回收后連接到酵母表達(dá)質(zhì)粒pGBKT7中，并轉(zhuǎn)化酵母AH109，色氨酸缺陷型培養(yǎng)基（SD／-Trp）上篩選陽性菌落，提取酵母蛋白質(zhì)，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS―PAGE）和Western免疫印跡分析，以明確PS1TP5是否可在其中表達(dá)。結(jié)果成功擴(kuò)增出PS1TP5，測(cè)序鑒定符合基因庫報(bào)告序列，酶切回收的PS1TP5基因片段成功克隆人酵母表達(dá)載體pGBKT7，并轉(zhuǎn)化人酵母細(xì)胞AH109中，Western免疫印跡顯示該基因在酵母細(xì)胞中成功表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物相對(duì)分子質(zhì)量為36950。由此得出結(jié)論成功構(gòu)建了PS1TP5酵母表達(dá)載體，并在酵母細(xì)胞中表達(dá)。/**/