（杭州）為了構建人原發性肝癌組織cDNA文庫，篩查與原發性肝癌發生特異相關的基因，為探討原發性肝癌的發病機制及基因治療奠定基礎。研究者提取人原發性肝癌組織總RNA并純化其mRNA,逆轉錄合成單鏈cDNA，長距離聚合酶鏈反應(PCR)合成雙鏈cDNA；PCR產物經蛋白酶K水解并純化后，進行SfiⅠ酶酶切；將酶切產物進行分級分離，回收0.4kb以上的組分，并與λTriplEx2載體連接,將連接產物經體外蛋白包裝，產生未擴增文庫；檢測未擴增文庫的滴度和重組效率后，進行文庫擴增；檢測擴增后文庫的滴度和重組效率，隨機挑取14個噬菌斑，用載體克隆位點兩端的通用引物進行PCR擴增，以檢測所構建的cDNA文庫的質量。結果未擴增文庫的滴度為1.37×106pfu/ml，重組效率為97.46%；擴增后文庫滴度為1.28×109pfu/ml，重組效率為99.06%；插入片段平均長度為0.95kb，長度在1.0～2.0kb的4個，0.75～1.0kb的4個，0.5～0.75kb的6個?？梢娨殉晒嫿ㄒ粋€乙型肝炎肝硬化基礎上發生的人原發性肝癌組織cDNA文庫。 /**/