（武漢）為了研究旨在構(gòu)建重組起搏基因質(zhì)粒pIRES2-EGFP-HCN2，并檢測(cè)其在體外心房肌細(xì)胞及犬病態(tài)竇房結(jié)綜合征(病竇)模型體內(nèi)的表達(dá)。研究者對(duì)含mHCN2 cDNA 的PTR 載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增，將所得mHCN2 基因定向克隆到真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP中，進(jìn)行雙酶切來(lái)鑒定克隆的正確性。將重組質(zhì)粒用電穿孔法轉(zhuǎn)染心房肌細(xì)胞，同時(shí)直接注射至犬病竇模型的竇房結(jié)區(qū)域，體表心電圖監(jiān)測(cè)犬竇房結(jié)功能改善情況，并通過(guò)熒光顯微鏡及RT-PCR檢測(cè)重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-HCN2在體內(nèi)外的表達(dá)。而對(duì)照組僅注射生理鹽水。結(jié)果 構(gòu)建了重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-HCN2。熒光顯微鏡下可見(jiàn)轉(zhuǎn)染后的心房肌細(xì)胞呈綠色熒光，其搏動(dòng)頻率較未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞明顯增快[(180±11)次/min 與 (140±14)次/ min，P＜0.05]。注射組織的冰凍切片顯示綠色熒光蛋白，RT-PCR顯示了mHCN2基因片段，體表心電圖顯示犬竇房結(jié)功能改善[(150±13)次/ min 與(105±17)次/ min，P＜0.05]。而對(duì)照組始終未見(jiàn)到綠色熒光蛋白表達(dá)及竇房結(jié)功能改善。可見(jiàn) 成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-HCN2，并在體外心房肌細(xì)胞及犬病竇模型體內(nèi)成功表達(dá)，為生物起搏的研究奠定基礎(chǔ)。/**/